猪霍乱沙门氏菌LAMP检测方法的建立与应用

利用猪霍乱沙门氏菌lacZ基因设计特异性引物,通过优化各种反应条件,建立了检测猪霍乱沙门氏菌的环介导等温扩增（LAMP）快速检测方法。此方法特异性好,灵敏度高,将细菌DNA稀释到10-8仍可检出,是PCR方法的1000倍。本研究建立的LAMP方法操作简便、灵敏度高、特异性强,为临床检测猪霍乱沙门氏菌和预防人猪霍乱沙门氏菌病提供了技术保障。     

5株水貂阿留申病毒的分离与鉴定

为给水貂阿留申病疫苗的研制奠定基础,对疑似感染阿留申病死亡的水貂内脏处理后,接种猫肾传代细胞（CRFK）分离病毒,并对分离的毒株进行PCR鉴定及动物回归试验。与此同时,首次应用免疫过氧化物酶单层细胞实验（IPMA）对所分离的水貂阿留申病毒进行TCID50的测定。结果成功分离并鉴定出5株水貂阿留申病毒株,分别命名为ADV-DL124、ADV-DL125、ADV-ZJ3、ADV-QD2、ADV-QD3,各分离株的TCID50分别为105.7TCID50/ml、105.0TCID50/ml、104.6 TCID50/mL、105.2 TCID50/mL、104.1 TCID50/mL。动物回归实验显示,所分离的病毒对水貂具有致病性,为水貂阿留申病毒强毒株。     

应用荧光定量RT-PCR检测J亚群禽白血病病毒

针对J亚群禽白血病病毒（ALV-J）基因序列保守区域设计一对特异性引物和一条特异性探针,通过构建重组阳性标准质粒作为阳性标准品,建立了检测ALV-J核酸的荧光定量PCR方法。优化反应体系和条件后进行特异性、敏感性、重复性试验。结果显示,该检测方法特异性强,与其它禽源病毒如A亚群禽白血病病毒（ALV-A）、B亚群禽白血病病毒（ALV-B）、新城疫病毒（ NDV）、禽流感病毒（AIV）、鸡传染性贫血病毒（CIAV）和马立克病病毒（MDV）均不发生交叉反应;该方法可检测到3.2×102拷贝/μL的病毒核酸,与常规RT-PCR相比,敏感性高100倍;重复性试验的变异系数小于2%。研究结果表明,建立的Real-time RT-PCR 检测方法特异性强、灵敏度高、可重复性好,可用于ALV-J的定量检测。     

鱼类神经坏死病毒纳米探针的制备与特征分析

为了快速检测鱼类神经坏死病毒,本研究设计了病毒特异性的发夹型探针,经硫醇修饰后与纳米银溶胶结合,制备了鱼类神经坏死病毒纳米探针（Ag-NNV）,并使用透射电镜、多功能酶标仪、表面增强拉曼光谱仪等对纳米探针Ag-NNV的表征及发夹型探针在纳米银粒子表面的覆盖率进行了测定和分析。结果表明,裸露的纳米银粒子为球形,平均直径50 nm;制备的纳米探针颗粒为球形,平均直径90 nm。纳米银粒子和纳米探针在溶液中均具有良好的分散性。平均每个纳米银粒子表面结合发夹型探针约100条,单位表面积的探针覆盖量为0.56 pmol/cm2。该纳米探针制备简便,适合用于表面增强拉曼散射法对鱼类神经坏死病毒进行快速检测。     

蛋白原料发酵后营养价值评定研究

本试验把蛋白原料膨化豆粕、棉籽粕、菜籽粕经过啤酒酵母菌、凝结芽孢杆菌以及德氏乳酸杆菌发酵处理后,得到相应的发酵蛋白原料产品指标符合国家饲料卫生标准,小肽含量及其他营养成分得到改善,抗营养因子含量基本消除和降低,显著提高了酵母菌、乳酸杆菌、芽孢杆菌和总菌数,大大提高了蛋白原料的附加值,为节约蛋白饲料,有效提高蛋白原料的综合利用价值开辟了一条新的途径.     

No effect of exogenous melatonin on development of cryopreserved metaphase II oocytes in mouse

Background

This study was conducted to investigate effect of exogenous melatonin on the development of mouse mature oocytes after cryopreservation.

Results

First, mouse metaphase II (MII) oocytes were vitrified in the open-pulled straws (OPS). After warming, they were cultured for 1 h in M₂ medium containing melatonin at different concentrations (0, 10⁻⁹, 10⁻⁷, 10⁻⁵, 10⁻³ mol/L). Then the oocytes were used to detect reactive oxygen species (ROS) and glutathione (GSH) levels (fluorescence microscopy), and the developmental potential after parthenogenetic activation. The experimental results showed that the ROS level and cleavage rate in 10⁻³ mol/L melatonin group was significantly lower than that in melatonin-free group (control). The GSH levels and blastocyst rates in all melatonin-treated groups were similar to that in control. Based on the above results, we detected the expression of gene Hsp90aa1, Hsf1, Hspa1b, Nrf2 and Bcl-x1 with qRT-PCR in oocytes treated with 10⁻⁷, or 10⁻³ mol/L melatonin and untreated control. After warming and culture for 1 h, the oocytes showed higher Hsp90aa1 expression in 10⁻⁷ mol/L melatonin-treated group than in the control (P < 0.05); the Hsf1, Hsp90aa1 and Bcl-x1 expression were significantly decreased in 10⁻³ mol/L melatonin-treated group when compared to the control. Based on the above results and previous research, we detected the development of vitrified-warmed oocytes treated with either 10⁻⁷ or 0 mol/L melatonin by in vitro fertilization. No difference was observed between them.

Conclusions

Our results indicate that the supplementation of melatonin (10⁻⁹ to 10⁻³ mol/L) in culture medium and incubation for 1 h did not improve the subsequent developmental potential of vitrified-warmed mouse MII oocytes, even if there were alteration in gene expression.     

银杏大蚕蝗白僵菌的分离、培养及应用试验

从银杏大蚕蛾僵死虫（蛹）尸上分离的白僵菌B21.1，经过室内扩大培养，生产出含孢量185亿孢子／g菌剂，以其2亿孢子／ml菌液对银杏大蚕蛾幼虫室内毒力测定，表现出很高的致病能力：4天死亡率近半，10天校正死亡率达到98.51%；林间喷雾防治,10天左右致病死亡近50％，21天校正死亡率为84.36％；与其它菌株（剂）试验比较，其致病死亡率和杀虫效果均明显高于其他各供试菌株，表现了较强的专化性。     

我国林业定位的研究

随着我国经济的发展，人民生活水平的提高，以及自然生态问题的日趋严重，林业被赋予了更新的使命。对林业的正确定位正是保证林业合理发挥其作用的重要前提。本文从市场定位学的思想出发，结合我国目前林业发展的实际情况，对林业定位的历史过程、林业定位所要考虑的因素进行了简单的回顾和分析，并对如何定位进行了探讨。     

木聚糖酶解反应与膜分离技术研究

过程耦合是应用技术领域研究的热点之一 ,膜及膜分离技术的开发促进了过程耦合技术的发展。如膜超滤、膜萃取、膜蒸馏、渗透蒸发。在超滤膜反应器中木聚糖酶解制备低聚木糖的条件 :酶体积用量1 0 % ,木聚糖质量浓度 3 0 .0 g/L ,稀释率 1h-1,pH值 5 .0 ,反应温度 48℃ ,酶解时间 1 3 5min。在该条件下 ,低聚木糖得率、木糖得率、低聚木糖生产能力及低聚木糖与总糖之比分别为 2 8.5 % ,4.1 % ,3 .80g/ (L·h)和0 .87,并比较了分批加料、浓缩酶、常规反应器中酶解反应效果 ,浓缩木聚糖酶酶解结果表明 :木糖得率很低(0 .2 % ) ,低聚木糖得率为 3 5 .9%。     

浙江天童常绿阔叶林中马尾松菌根研究

通过对浙江天童常绿阔叶林中马尾松的菌根研究,比较分析了马尾松在不同样地及不同季节菌根感染率的状况,结果表明,菌根感染率与季节及样地类型有密切的联系,12月份左右,在裸地中菌根感染率较低,只有2.67%;而7月份左右,在马尾松林中,菌根感染率达到了76%.其次,通过一年多对各样地子实体的采集研究和实验室分析,确定在这个阔叶林中与马尾松共生的菌根真菌共4科6属8种,其中硬皮马勃科（Scleroderrnataceae）豆马勃属（Pisolithus）的彩色豆马勃（P.tinctorius（Pers.））和大包硬皮马勃（S.bovista Fr.）以及红菇科（Russulacese）乳菇属（Lactarius Dcex Gray）的松乳菇（L.deliciosus（L.ex.Fr）Gery）分布较广泛,在多数样地中均可找到相应的子实体.最后,本文通过菌根在生态系统中的作用,初步探讨了菌根与常绿阔叶林整体退化机制之间的关系.